Mighty pfu DNA Polymerase（P271）
高保真DNA聚合酶
- 货号/规格
产品说明
Mighty pfu DNA Polymerase是一种高保真DNA聚合酶，由经典的pfu DNA聚合酶经过基因工程改造获得。改造后的Mighty pfu DNA Polymerase具有更强的3′→5′外切酶活性、极高的扩增效率，因此具有更好的校正功能、广泛的模板适应性，扩增速度可以达到15-30s/kb，扩增产物为平末端，能够直接用于平末端克隆，推荐使用本公司生产的pAgile-Blunt Cloning Kit（货号：C141）。
产品组分
| 组分 | P271S | P271M | P271L |
| Mighty pfu DNA Polymerase (5 U/μL) | 100 μL*1 | 500 μL*1 | 1 mL*1 |
| 5X Mighty pfu PCR Buffer | 1.25 mL*2 | 1.25 mL*10 | 1.25 mL*20 |
| dNTP Mix (10 mM each) | 100 μL*1 | 500 μL*1 | 1 mL*1 |
| 10X DNA Loading Buffer | 1.25 mL*1 | 1.25 mL*5 | 1.25 mL*10 |
储存条件
-20℃保存。
FAQs
Q1：无扩增产物或产物量少
A1：（1）模板质量
检查模板是否降解，提高模板纯度
（2）模板使用量
参考说明书使用适量的模板DNA
（3）引物浓度
在0.2-0.5 μM范围内调整引物终浓度
（4）退火温度
以2 ℃为梯度降低温度，寻找合适的退火温度
（5）扩增循环数
循环数增加到35-40个循环
（6）延伸时间
适当增加延伸时间至30-60 s/kb
（7）酶使用量
适当提高酶使用量
Q2：有非特异性条带或弥散条带
A2：（1）模板质量
检查模板是否降解，使用高质量模板
（2）模板使用量
参考说明书调整模板使用量
（3）引物浓度
在0.15-0.2 μM范围内调整引物终浓度
（4）退火温度
以2 ℃为梯度提高温度，寻找合适的退火温度
（5）扩增循环数
循环数减少到25-30个循环
（6）延伸时间
如果杂带大于目的条带可以适当减少延伸时间
（7）酶使用量
减少酶量至1.25 U/50 μL反应体系
Q3：扩增产物如何加A尾
A3：按照下表配置反应体系
| 试剂 | 使用量/μL |
| ddH2O | Add to 20 |
| 10× Taq PCR Buffer | 2 |
| dNTP Mix (10mM each) | 0.5 |
| 纯化的PCR产物 | 1~7 |
| Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.2 |
说明书
Mighty pfu DNA Polymerase_manual.pdf (点击下载)
