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Mighty pfu DNA Polymerase(P271)

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¥ 339.00
Mighty pfu DNA Polymerase (5 U/μL)
高保真DNA聚合酶
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产品说明
Mighty pfu DNA Polymerase是一种高保真DNA聚合酶,由经典的pfu DNA聚合酶经过基因工程改造获得。改造后的Mighty pfu DNA Polymerase具有更强的3′→5′外切酶活性、极高的扩增效率,因此具有更好的校正功能、广泛的模板适应性,扩增速度可以达到15-30s/kb,扩增产物为平末端,能够直接用于平末端克隆,推荐使用本公司生产的pAgile-Blunt Cloning Kit(货号:C141)。
 

产品组分

组分 P271S P271M P271L
Mighty pfu DNA Polymerase (5 U/μL) 100 μL*1 500 μL*1 1 mL*1
5X Mighty pfu PCR Buffer 1.25 mL*2 1.25 mL*10 1.25 mL*20
dNTP Mix (10 mM each) 100 μL*1 500 μL*1 1 mL*1
10X DNA Loading Buffer 1.25 mL*1 1.25 mL*5 1.25 mL*10

 

储存条件
-20℃保存。
 

FAQs

Q1:无扩增产物或产物量少

A1:(1)模板质量

            检查模板是否降解,提高模板纯度

         (2)模板使用量

            参考说明书使用适量的模板DNA

         (3)引物浓度

            在0.2-0.5 μM范围内调整引物终浓度

         (4)退火温度

           以2 ℃为梯度降低温度,寻找合适的退火温度

         (5)扩增循环数

           循环数增加到35-40个循环

         (6)延伸时间

           适当增加延伸时间至30-60 s/kb

         (7)酶使用量

           适当提高酶使用量

 

Q2:有非特异性条带或弥散条带

A2:(1)模板质量

           检查模板是否降解,使用高质量模板

         (2)模板使用量

           参考说明书调整模板使用量

         (3)引物浓度

           在0.15-0.2 μM范围内调整引物终浓度

         (4)退火温度

           以2 ℃为梯度提高温度,寻找合适的退火温度

         (5)扩增循环数

           循环数减少到25-30个循环

         (6)延伸时间

           如果杂带大于目的条带可以适当减少延伸时间

         (7)酶使用量

           减少酶量至1.25 U/50 μL反应体系

 

Q3:扩增产物如何加A尾
A3:按照下表配置反应体系

 

试剂 使用量/μL
ddH2O Add to 20
10× Taq PCR Buffer 2
dNTP Mix (10mM each) 0.5
纯化的PCR产物 1~7
Taq DNA Polymerase (5U/μL) 0.2

 

 

说明书

Mighty pfu DNA Polymerase_manual.pdf (点击下载)