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pAgile-T Cloning Kit(C131)

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¥ 999.00
pAgile-T Cloning Kit
高效的TA克隆试剂盒
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产品说明

pAgile-T Cloning Kit使用ccdB自杀基因,能够有效避免载体“自连”的出现,使TA克隆变得极其简单,克隆阳性率不低于98%,通常不需要菌检验证即可轻易获得阳性克隆。


pAgile-T载体“自连”会表达自杀基因,使得宿主细胞无法正常生长形成克隆,当插入片段与载体连接会破坏ccdB表达,宿主细胞能够正常生长,从而实现“零背景”克隆。

 

产品组分

组分 C131
pAgile-T Vector (30 ng/μL) 20 μL*1
2X T4 DNA Ligase Buffer (Enhancer Added) 1 mL*1
TA Control Insert (20 ng/μL) 10 μL*1
T4 DNA Ligase (1,000 U/μL) [1] 20 μL*1
Forward Primer (10 nmol) 10 nmol*1
Reverse Primer (10 nmol) 10 nmol*1
Agile Competent E. coli [2] 20 Tubes

[1] 活性定义:在16℃、30min内将50% HindⅢ酶切的λ DNA连接所需要的酶量定义为1 U。
[2] 收到本试剂盒请立刻将Agile Competent E. coli置于 –80℃ 保存。

 

储存条件

组分 保存条件
pAgile-T Vector (30 ng/μL) -20
2X T4 DNA Ligase Buffer (Enhancer Added)
Blunt Control Insert (20 ng/μL)
T4 DNA Ligase (1000 U/μL)
Forward Primer (10 nmol)
Reverse Primer (10 nmol)
Agile Competent E. coli -80

 

FAQs

Q1:平板没有克隆或克隆很少
A1:(1)平板抗性不正确
            使用正确抗性的平板
         (2)没有使用本试剂盒提供的高效价感受态细胞
         (3)使用高保真DNA聚合酶扩增产物
           高保真DNA聚合酶扩增产物不能直接使用本试剂盒克隆,对PCR产物加A尾后再进行TA克隆

 

Q2:高保真DNA聚合酶扩增产物如何加A尾
A2:按照下表配置反应体系     

试剂 使用量/μL
ddH2O Add to 20
10× Taq PCR Buffer 2
dNTP Mix (10mM each) 0.5
纯化的PCR产物 1~7
Taq DNA Polymerase (5U/μL) 0.2

反应条件:72℃,15~30 min.

 

说明书 

pAgile-T Cloning Kit_manual.pdf (点击下载)

 

¥799.00