pAgile-Blunt Cloning Kit（C141）
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999.00
pAgile-Blunt Cloning Kit
高效的平末端克隆试剂盒，零背景克隆，克服载体自连的弊端
高效的平末端克隆试剂盒，零背景克隆，克服载体自连的弊端
- 货号/规格
产品说明
平末端克隆时，载体“自连”给研究人员带来很大的麻烦，pAgile-Blunt Cloning Kit使用ccdB自杀基因，能够有效避免载体“自连”的出现，使平末端克隆变得极其简单，克隆阳性率不低于98%，通常不需要菌检验证即可轻易获得阳性克隆。
pAgile-Blunt载体“自连”会表达自杀基因，使得宿主细胞无法正常生长形成克隆，当插入片段与载体连接会破坏ccdB表达，宿主细胞能够正常生长，从而实现“零背景”克隆。
产品组分
| 组分 | C141 |
| pAgile-T Vector (30 ng/μL) | 20 μL*1 |
| 2X T4 DNA Ligase Buffer (Enhancer Added) | 1 mL*1 |
| Blunt Control Insert (20 ng/μL) | 10 μL*1 |
| T4 DNA Ligase (1,000 U/μL) [1] | 20 μL*1 |
| Forward Primer (10 nmol) | 10 nmol*1 |
| Reverse Primer (10 nmol) | 10 nmol*1 |
| Agile Competent E. coli [2] | 20 Tubes |
[1] 活性定义：在16℃、30min内将50% HindⅢ酶切的λ DNA连接所需要的酶量定义为1 U。
[2] 收到本试剂盒请立刻将Agile Competent E. coli置于 –80℃ 保存。
储存条件
| 组分 | 保存条件 |
| pAgile-Blunt Vector (30 ng/μL) | -20℃ |
| 2X T4 DNA Ligase Buffer (Enhancer Added) | |
| Blunt Control Insert (20 ng/μL) | |
| T4 DNA Ligase (1000 U/μL) | |
| Forward Primer (10 nmol) | |
| Reverse Primer (10 nmol) | |
| Agile Competent E. coli | -80℃ |
FAQs
Q1：平板没有克隆或克隆很少
A1：（1）平板抗性不正确
使用含IPTG的卡那霉素抗性LB平板
（2）没有使用本试剂盒提供的高效价感受态细胞
（3）使用Taq DNA聚合酶扩增产物
Taq DNA聚合酶扩增产物3′端突出一个A碱基，不能使用本试剂盒，推荐使用本公司的pAgile-T Cloning Kit (货号：C180)
Q2：高保真DNA聚合酶扩增产物如何加A尾
A2：按照下表配置反应体系
| 试剂 | 使用量/μL |
| ddH2O | Add to 20 |
| 10× Taq PCR Buffer | 2 |
| dNTP Mix (10mM each) | 0.5 |
| 纯化的PCR产物 | 1~7 |
| Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.2 |
反应条件：72℃，15~30 min.
说明书
pAgile-Blunt Cloning Kit_manual.pdf (点击下载)
