HS Mighty pfu DNA Polymerase(P272)
热启动高保真DNA聚合酶
- 货号/规格
产品说明
HS Mighty pfu DNA Polymerase是一种高保真DNA聚合酶,由经典的pfu DNA聚合酶经过基因工程改造获得。改造后的HS Mighty pfu DNA Polymerase具有更强的3′→5′外切酶活性、极高的扩增效率,因此具有更好的校正功能、广泛的模板适应性,扩增速度可以达到15-30s/kb。
HS Mighty pfu DNA Polymerase含有在常温下能够抑制聚合酶活性和3′→5′外切酶活性的单克隆抗体,可用于热启动PCR,扩增产物为平末端,能够直接用于平末端克隆,推荐使用本公司生产的pAgile-Blunt Cloning Kit(货号:C141)。
产品组分
组分 | P272S | P272M | P272L |
HS Mighty pfu DNA Polymerase (5 U/μL) | 100 μL*1 | 500 μL*1 | 1 mL*1 |
5X Mighty pfu PCR Buffer | 1.25 mL*2 | 1.25 mL*10 | 1.25 mL*20 |
dNTP Mix (10 mM each) | 100 μL*1 | 500 μL*1 | 1 mL*1 |
10X DNA Loading Buffer | 1.25 mL*1 | 1.25 mL*5 | 1.25 mL*10 |
储存条件
-20℃保存。
FAQs
Q1:无扩增产物或产物量少
A1:(1)模板质量
检查模板是否降解,提高模板纯度
(2)模板使用量
参考说明书使用适量的模板DNA
(3)引物浓度
在0.2-0.5 μM范围内调整引物终浓度
(4)退火温度
以2 ℃为梯度降低温度,寻找合适的退火温度
(5)扩增循环数
循环数增加到35-40个循环
(6)延伸时间
适当增加延伸时间至30-60 s/kb
(7)酶使用量
适当提高酶使用量
Q2:有非特异性条带或弥散条带
A2:(1)模板质量
检查模板是否降解,使用高质量模板
(2)模板使用量
参考说明书调整模板使用量
(3)引物浓度
在0.15-0.2 μM范围内调整引物终浓度
(4)退火温度
以2 ℃为梯度提高温度,寻找合适的退火温度
(5)扩增循环数
循环数减少到25-30个循环
(6)延伸时间
如果杂带大于目的条带可以适当减少延伸时间
(7)酶使用量
减少酶量至1.25 U/50 μL反应体系
Q3:扩增产物如何加A尾
A3:按照下表配置反应体系
试剂 | 使用量/μL |
ddH2O | Add to 20 |
10× Taq PCR Buffer | 2 |
dNTP Mix (10mM each) | 0.5 |
纯化的PCR产物 | 1~7 |
Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 0.2 |
说明书
HS Mighty pfu DNA Polymerase_manual.pdf (点击下载)